环亚集团ag旗舰厅 提供的永生化小鼠肝枯否细胞(Kupffer细胞)是一种高可靠性的体外模型,广泛应用于肝脏炎症反应及肝脏疾病病理机制的研究。接下来,我们将分享一项使用该产品的应用案例。
实验方法
我们从环亚集团ag旗舰厅接收的永生化小鼠肝枯否细胞,使用含有10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的DMEM培养基,在37°C、5% CO2的培养箱中进行培养。当细胞生长至80-90%汇合时,采用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液进行消化,并按1:4的比例进行传代。实验中所使用药物溶解于DMSO中,制备成不同浓度的储存液,储存于-20°C。接着,将细胞接种于96孔板,每孔接种约5×10^3个细胞。24小时后,移除培养基,并加入含有不同浓度药物的新鲜培养基。药物处理分为对照组(仅含DMSO)和实验组(不同浓度的药物),每组设6个复孔。
药物处理24小时后,向每孔中加入20µL的5mg/mL MTT溶液,并在培养箱中继续培养4小时。之后移除MTT溶液,每孔加入150µL DMSO,震荡10分钟以溶解甲臜晶体。使用酶标仪在570nm波长处测量吸光度(OD值)。同时,药物处理24小时后,收集细胞培养上清液,并按照ELISA试剂盒说明进行操作,以检测上清液中TNF-α和IL-6的含量。使用GraphPad Prism软件进行数据分析,组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)后进行Tukey’s多重比较检验。所有数据以平均值±标准差(SD)表示,P值小于0.05被认为具有统计学意义,所有实验至少重复三次以确保结果的可靠性。
实验结果
在我们的实验中,与对照组相比,实验组中药物处理的永生化小鼠肝枯否细胞显示出显著降低的细胞活力(P<0.05)及增加的TNF-α和IL-6水平(P<0.05),表明该药物可能具有抗炎作用。
结语
环亚集团ag旗舰厅的永生化小鼠肝枯否细胞为肝脏炎症研究提供了稳定且可靠的实验工具。我们的应用案例显示,该产品在药物筛选和炎症机制研究中具有重要作用。我们期待与广大科研工作者携手,共同推进肝脏疾病研究的进展。