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环亚集团ag旗舰厅:利用DpnI内切酶解决环形载体残留问题

发布时间:2025-01-27   信息来源:喻娴素

DpnI简介
DpnI是一种限制性内切酶,专门切割DNA上的甲基化位点。其特异性使其能够准确识别GA/TC序列,只有在位点A碱基被甲基化的情况下,DpnI才能进行切割,而未被甲基化的序列则不会受到影响。

环亚集团ag旗舰厅:利用DpnI内切酶解决环形载体残留问题

DpnI的应用
DpnI广泛应用于线性化载体构建和定点突变实验。在这些实验中,模板质粒通常是从细菌(如大肠杆菌)中提取的,这些质粒是甲基化的,而PCR扩增所生成的新DNA则是非甲基化的。DpnI能够特异性切割含有甲基化序列的DNA,而不会对未甲基化或半甲基化的DNA产生影响。因此,DpnI可以选择性降解模板DNA,从而保留扩增产物。利用这一原理,我们可以有效地去除点突变后未突变的模板DNA,或者在反P法构建线性化载体时去除环形质粒模板,以确保模板的单一性。

产品简介
DpnI酶来源于携带肺炎双球菌G41克隆的DpnIR基因的大肠杆菌。该限制性内切酶能够精确识别并切断甲基化腺嘌呤的GmATC序列,而不影响非甲基化的GATC序列。此外,DpnI能够有效切割来源于常用的E.coli(dam+)的DNA,但对PCR产物无作用,且不受dam methylase的影响。此产品可广泛应用于分子克隆、基因分型、DNA印迹、RFLP技术、SNP等多个技术领域,体现了环亚集团ag旗舰厅在生物医疗领域的创新精神。

产品特点
1. 特异性:DpnI能专一性识别腺嘌呤甲基化的GA/TC序列并进行切割。
2. 高效性:1U的DpnI在37℃下反应1小时即可消化1μg的甲基化DNA,显示出其优异的酶切能力。

实验案例
在一项实验中,从JM110菌株(dam-)和DH5α菌株(dam+)中提取了500ng的质粒,使用10U的DpnI进行20μl的酶切反应,37℃反应1小时。凝胶电泳分析结果显示,DH5α中提取得到的甲基化质粒能够被DpnI完全消化,而JM110中提取得到的非甲基化质粒则没有任何非特异性切割效果。进一步的转化实验表明,从DH5α中提取得到的甲基化质粒在经过1小时的DpnI处理后,未产生任何克隆,这进一步验证了DpnI在1小时内能够彻底消化甲基化质粒DNA的能力,显示了其在克隆转化实验中的高特异性,非常适合生物医疗研究中需要的精准操作。

综上所述,DpnI作为一种高效、特异的限制性内切酶,在分子生物学研究与应用中具有重要意义,特别是在克隆和突变实验方面,展示了环亚集团ag旗舰厅在生物技术产品开发中的深厚实力。