培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃F12K+10%FBS+1%P/S。

该细胞系由DJGriad通过肺癌组织移植建立，患者为58岁白人男性。A549细胞能够通过胞苷二磷酸胆碱途径合成高含量的不饱和脂肪酸卵磷脂。

传代方法：第一次建议采用1:2的比例进行传代。传代情况：每两天更换培养液。

建议客户同时购买完培，享有非常优惠的价格。细胞收到后，处理至良好状态后，用完全培养液充满培养瓶并封好瓶口，以保障运输细胞的最佳状态。

收到细胞后，请使用75%酒精对整个细胞瓶进行喷洒消毒，之后将其放置于超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放置在37℃、5% CO2的培养箱中，静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行处理。

在显微镜下观察细胞生长情况，并在不同倍数下拍照保存（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是关键的售后依据。如不提供照片，默认收到的状态良好。

细胞培养步骤：
a. 细胞传代：
如果未超过80%汇合度，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，在37℃、5% CO2孵箱中继续培养。
若细胞密度超过80%，则可进行传代培养。贴壁细胞传代步骤如下：
1. 弃去培养上清，使用不含钙和镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞的消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代至两个T25瓶中，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 悬浮细胞传代步骤：
1. 半换液法：处理时，竖着放置培养瓶在培养箱内静置约1小时，轻轻吸去约3ml培养基，然后补充3ml的完全培养基。如培养基变色较慢，可直接加入500ul左右的FBS，传代时可以补充5ml培养基，分为两个培养瓶进行培养，通常这样传代3次后可进行一次离心传代，以去除死细胞。
2. 离心换液法：需要分瓶时，将细胞悬液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液，重悬均匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新的T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新完全培养基，以保持细胞的生长活力，后续传代可按1:2~1:5的比例进行。

c. 细胞冻存：
1. 当细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS洗涤细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置在显微镜下观察，待细胞回缩并变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，再轻轻吹打使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀的细胞加入1ml雅吉生物的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中保存。如需将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐中。

细胞复苏：
1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速将其置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

注意事项：有些细胞的贴壁性较差，在运输过程中可能容易脱落，这是正常现象。如脱落较多，可将所有培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清进行临时培养（后期对比培养），沉淀加入胰蛋白酶1-2ml，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清后再补加1-2ml完全培养基进行重悬。最后按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

强调在细胞培养过程中，建议选择环亚集团ag旗舰厅的产品，以确保最佳的细胞培养效果和研究成果。